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兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)elisa試劑?操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):445 更新時(shí)間:2023-03-15

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)elisa試劑操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

 柚皮素英文名稱:Naringenin480-41-1分子式:272.25278

 羽扇豆醇英文名稱:Lupeol545-47-1分子式:426.7174

 鳶尾苷元磺酸鈉英文名稱:Tectorigenin sodium sulfonate548-77-6分子式:300.26

原花青素英文名稱:Primary anthocyanin4852-22-6分子式:594.52

 α-香附酮英文名稱:A-cyperone473-08-5分子式:218.33458

 槲皮苷英文名稱:Quercitrin522-12-3分子式:448.3769

 西貝堿英文名稱:Sipeimine61825-98-7分子式:429.64

 西紅花苷Ⅱ英文名稱:Crocin II55750-84-0分子式:814.82

 西紅花苷I英文名稱:Crocin I94238-00-3分子式:976.96456

 仙茅苷英文名稱:Cents a85643-19-2分子式:466.44

 相思豆堿 英文名稱:Acacia base21339-55-9分子式:218.25

 香蒲新苷英文名稱:Typhaneoside104472-68-6分子式:770.68528


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