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原代細胞的分離與培養(yǎng)
點擊次數(shù):650 更新時間:2020-07-24
   原代細胞是指來源活體組織,經(jīng)過特定分離方法制備而成的初始細胞。
  原代細胞離體時間短且不經(jīng)過永生化過程,其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化,仍保持原有的遺傳特征,可更好地反映細胞在體內(nèi)的生長狀態(tài),從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù),很適合用于藥物測試、細胞分化和轉(zhuǎn)化等實驗研究。
  原代細胞是出了名的難養(yǎng),對培養(yǎng)環(huán)境和實驗操作的要求更苛刻。細胞在體外通常只能傳代少數(shù)幾次,某些細胞(如神經(jīng)元細胞)甚至無法進行傳代。對于研究人員來說,如何才能經(jīng)濟高效地培養(yǎng)好細胞,并圍繞這有限幾次傳代的細胞設(shè)計實驗,是更大的一個挑戰(zhàn)。
  原代細胞是取材于切除的動物組織,通過酶處理,在適當?shù)臈l件下培養(yǎng)直至達到足夠的數(shù)量。分離的細胞有兩種類型:貼壁細胞(錨定依賴性生長)和懸浮細胞(錨定非依賴性),貼壁細胞多來自器官組織,而懸浮細胞多來自血液系統(tǒng)的細胞。
  從組織制備細胞,即使捱過了極其嚴苛的解離步驟,不嚴謹?shù)姆蛛x操作可能會導(dǎo)致細胞生長緩慢、表型不一致甚至細胞污染,特別是由于組織中可能含有細菌等微生物,污染問題對于細胞的分離和培養(yǎng)是一個很大的隱患。而為了讓研究人員不再為這些問題頭疼,現(xiàn)在已經(jīng)出現(xiàn)了一些細胞公司可供應(yīng)現(xiàn)成的細胞,并對應(yīng)配有充分優(yōu)化的培養(yǎng)基和實驗方案,這使得細胞的培養(yǎng)和研究比以往要輕松得多。
  而對于具備自主從組織中獲取細胞的實驗室,也建議以商業(yè)化的細胞作為對照,采用均一性和穩(wěn)定性更好的P2/P3代次進行實驗,并用專門的細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng),zui大限度提高原代細胞的生長。
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