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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

前列腺位于膀胱頸下方，包繞著膀胱口與尿道結(jié)合部位。前列腺腺體主要由 3種細胞構成，即分泌細胞、基底細胞和神經(jīng)細胞。基底細胞約占前列腺細胞總數(shù)的10%，不具有分泌功能，被認為是前列腺的多潛能干細胞。前列腺基底細胞是前列腺固有腺體中在分泌上皮和基底膜之間單層排列的一層細胞，核小，缺乏胞質(zhì)。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常前列腺組織。

2)細胞鑒定：肌上皮標記物(P63)熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代基底細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠氧鯊烯環(huán)化酶(OSC)檢測試劑盒 ，英文名： OSC ELISA Kit

Mouse gelsolin (Gelsolin) ELISA Kit 小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)檢測試劑盒

MouseCiliaryNeuroophicFactor,CFELISAKit 小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanComplemefragme5a,C5aELISAKit人補體片斷5a

細胞CaMKII激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitOPG大鼠骨保護素

CHODL重組大鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白  Protein

Gelsolin 凝溶膠蛋白抗原 0.5mgGelsolin 凝溶膠蛋白抗原

FH重組人 Fumarate Hydratase / FH 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His 標簽)

BLMH Protein Mouse 重組小鼠 BLMH / Bleomycin Hydrolase 蛋白 (His 標簽)

Gelsolin 凝溶膠蛋白抗原 0.5mgGelsolin 凝溶膠蛋白抗原

FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His 標簽)

CHODL重組大鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白  Protein

BLMH Protein Mouse 重組小鼠 BLMH / Bleomycin Hydrolase 蛋白 (His 標簽)

FH重組人 Fumarate Hydratase / FH 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA 試劑盒

Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)檢測試劑盒

Humahrombospondin1,TSP-1ELISAKit 人血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)檢測試劑盒 進口分裝

HumanApolipoproteinE,Apo-E檢測試劑盒人載脂蛋白E(Apo-E)檢測試劑盒

植物葉綠體F型ATP酶(FtypeATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

humaoll-likereceptor2,TLR2ELISAKit人toll樣受體2(TLR2)檢測試劑盒

兔前列腺基底細胞小量DNA產(chǎn)物化試劑盒   Small DNA product purification kit

小量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒   Small agarose gel DNA recycling Kit

大量DNA產(chǎn)物化試劑盒   A lot of DNA product purification kit

多功能DNA化回收試劑盒   Multifunctional DNA purification and recycling Kit

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。