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細(xì)胞簡介：

直腸是自緣起向上 15cm的一段大腸。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，腫瘤間質(zhì)對腫瘤的發(fā)展有著重要作用。

成纖維細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成成分 ,與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。腫瘤間質(zhì)中成纖維細(xì)胞活化為癌相關(guān)成纖維細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞-成纖維細(xì)胞相互作用過程中的一個重要過程,是成纖維細(xì)胞發(fā)揮腫瘤調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵。同時成纖維細(xì)胞的變化也與許多其他直腸密切相關(guān)。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于手術(shù)切除的正常直腸組織。

2)細(xì)胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子血小板活化因子(PAF)ELISA 試劑盒

Rat angiopoietin receptor Tie1 (ANG-R-Tie1) ELISA Kit 大鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)檢測試劑盒

Humanhiston-H2bELISAKit 人組蛋白H2b(histon-H2b)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

Humancytovillin/ezrin,CVL檢測試劑盒人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)檢測試劑盒

組織INSULI激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanplasminogenactivatorinhibitor1，PAI-1ELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)檢測試劑盒

PLA2G12B重組小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mg2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白

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AK4 Protein Human 重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

LTBR Protein Rat 重組大鼠 LTBR / TNFRSF3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mg2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白

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LTBR Protein Rat 重組大鼠 LTBR / TNFRSF3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

USP46重組人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein

豬白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒

Human ai Mi2 aibody (ai-Mi2-Ab) ELISA Kit 人抗Mi2抗體(ai-Mi2-Ab)檢測試劑盒

PorcineN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforALA/LCA(Humanai-lymphocytotoxicaibody)ELISAKit人抗淋巴細(xì)胞毒抗體

血液型纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)活性熒光定量檢測試劑盒20次

MouseUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)檢測試劑盒

人直腸成纖維細(xì)胞中文名稱   方法   規(guī)格

雞β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISAKit   ELISA.  

雞免疫球蛋白E(IgE)ELISAKit   ELISA.  

雞免疫球蛋白A(IgA)ELISAKit   ELISA.