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細胞簡介：

?癌組織由實質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細胞構(gòu)成癌實質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實質(zhì)的作用，不具有特異性。

當實體瘤超過 1-2mm時，需要通過新生的血管和活化的癌相關成纖維細胞來獲取癌細胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關成纖維細胞可通過分泌多種細胞因子和生長因子來發(fā)揮促進癌血管生成的作用。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也能觀察到相似的EMT過程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直接決定腫瘤的發(fā)展。多種因素可影響該界面，其中癌相關成纖維細胞是數(shù)量豐富的基質(zhì)細胞，在調(diào)節(jié)腫瘤細胞EMT過程中發(fā)揮重要作用。它通過細胞與細胞間相互接觸及分泌各種細胞因子、蛋白酶類等，促進上皮細胞及其細胞惡性轉(zhuǎn)化，并對界面各組分產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。

細胞特性：

1）細胞來源于人手術胃癌組織。

2）細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3）經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細胞生長方式：長梭形，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA 試劑盒

Rat ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)檢測試劑盒

HumanovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 人卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)檢測試劑盒 進口分裝

Humanai-BullousPemphigoid180aibody,BP180-Ab檢測試劑盒人抗BP180抗體(BP180-Ab)檢測試劑盒

植物核糖體分離試劑盒10次

Humanα-L-iduronidase,IDUAELISAKit人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)檢測試劑盒

VCAM1重組人 VCAM-1 / CD106 蛋白 (His 標簽) Protein

雄激素受體(AR)重組蛋白 Recombinant Androgen Receptor (AR)

IL23重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 標簽) Protein

AGT Protein Human 重組人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT 蛋白 (His 標簽)

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 367-606, Fc 標簽)

雄激素受體(AR)重組蛋白 Recombinant Androgen Receptor (AR)

AGT Protein Human 重組人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT 蛋白 (His 標簽)

VCAM1重組人 VCAM-1 / CD106 蛋白 (His 標簽) Protein

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 367-606, Fc 標簽)

IL23重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 標簽) Protein

豬α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒

Human ai murine typhus aibody (ai-typhus-Ab) ELISA Kit 人抗斑疹傷寒抗體(ai-typhus-Ab)檢測試劑盒

Porcineierleukin8,IL-8ELISAKit 豬白介素8(IL-8/CXCL8)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAgIa(HumanangiotensinIIreceptoypeIa)ELISAKit人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型

血液牛病毒性腹瀉病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定性試劑盒20次

MouseypsinELISAKit小鼠(ypsin)檢測試劑盒

人胃癌相關成纖維細胞質(zhì)粒大量提取試劑盒（非柱式法）   5T

QSPlasmidMaxiKit   10T

血液(溶液型）   10ml（血量）

Relax-ISOBloodDNAKitI   50ml（血量）

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。