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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

乳腺導(dǎo)管位于胸部的皮下組織中，是的主要構(gòu)成組織之一，也是乳汁的排泄管道。乳腺管的主要功能是乳汁的排泄和儲(chǔ)存

每個(gè)乳腺葉都有一個(gè)輸乳管，輸乳管會(huì)在近處形成膨大的輸入管竇，末端變細(xì)并開(kāi)口于。 乳腺被結(jié)締組織分隔為 15-25個(gè) 葉，每個(gè)葉又分為若干小葉，每個(gè)小葉是一個(gè)復(fù)管泡狀腺。

腺泡上皮為單層立方或柱狀，導(dǎo)管包括小葉內(nèi)導(dǎo)管、上間導(dǎo)管和總導(dǎo)管。小葉內(nèi)導(dǎo)管多為單層柱狀或立方上皮，小葉間導(dǎo)管為復(fù)層柱狀上皮，總導(dǎo)管又稱輸乳管，開(kāi)口于，管壁為復(fù)層扁平上皮，下表皮相續(xù)。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常乳腺組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白（PCK）熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代上皮 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)elisa檢測(cè)試劑盒

人蛋白酶3(PR3)elisa分析檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞磷酸甲羥戊酸激酶（phosphomevalonate kinase）活性

小鼠B9(VB9)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)elisa檢測(cè)試劑盒

防脫載玻片經(jīng)APES處理 50片

細(xì)胞NF KAPPA B P65蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒

馬白介素6(IL-6)elisa分析檢測(cè)試劑盒

味覺(jué)2型受體蛋白家族49抗體 TAS2R49

細(xì)胞骨架銜接蛋白BIN3抗體 BIN3

src原癌基因單克隆抗體 SRC

TRIM43B蛋白抗體 TRIM43B

AF680標(biāo)記的上皮細(xì)胞粘附分子（CD326）抗體 EpCAM, Alexa Fluor 680 conjugated

AF750標(biāo)記的造血干細(xì)胞抗原CD133抗體 CD133, Alexa Fluor 750 conjugated

緊密連接蛋白2單克隆抗體 Claudin 2

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白126抗體 CCDC126

原鈣粘蛋白γA1抗體 PCDHGA1

粘蛋白20抗體 MUC20

分泌型磷脂酶A2亞基5抗體 Secretory phospholipase A2 Type V

富含脯蛋白18抗體 PRR18

G蛋白偶聯(lián)受體γ4抗體 G gamma4

HRP標(biāo)記的人CD34單克隆抗體 CD34, HRP conjugated

酶原酶/維介素抗體 FGL2

大鼠促黃體 （LH）elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠毒蕈堿型乙酰受體(M-AChR)elisa分析檢測(cè)試劑盒

M-AChR ELISA Kit

山羊超氧化物歧化酶1,可溶性(SOD1)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞soluble(SOD1)ELISAkit