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細胞簡介：

頸動脈存在于脊椎動物頸部的動脈。有頸外動脈和頸內(nèi)動脈，前者分布至頭頂部和顏面部，后者進入顱內(nèi)分布至腦和眼眶內(nèi)。

內(nèi)皮細胞層是血液和其它組織的天然屏障。內(nèi)皮細胞功能病變是造成動脈粥樣硬化的主要原因。內(nèi)皮細胞同時會合成和分泌和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的增強和抑制物，以及影響血小板粘附和聚集的媒介物。它們同時也會分泌控制細胞增殖的蛋白來維持血管壁的健康。

內(nèi)皮細胞會分泌 t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應TNF-α，繼而分泌細胞因子GM-CSF，表達ICAM-1表面抗體，產(chǎn)生大量的一氧化氮和endothelin。原代動脈內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)系統(tǒng)有助于在特定的體外條件下研究血管內(nèi)皮細胞的功能。

細胞特性：

1）或血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：上皮樣，多角形細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代內(nèi)皮 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素28B(IL-28B)檢測試劑盒 ，英文名： IL-28B ELISA Kit

Mouse ierleukin 8 (IL-8/CXCL8) ELISA Kit 小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)檢測試劑盒

ELISA 小鼠類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-3(mouse IGBPF-3)  進口分裝

CLIAKitforIMA(HumanIschemiaModifiedAlbumin)ELISAKit人缺血修飾白蛋白

通用型胱(cystine)含量比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitINH-B大鼠抑制素B

IL21R重組大鼠 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 Protein

Ghrelin 腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽 0.5mgGhrelin 腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽)多肽抗原

KLK8重組人 KLK-8 / Kallikrein-8 蛋白 Protein

EPHA4 Protein Human 重組人 EphA4 / HEK8 蛋白 (aa 570-986, His & GST 標簽)

FLT4 Protein Mouse 重組小鼠 VEGFR3 / FLT-4 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

Ghrelin 腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽 0.5mgGhrelin 腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽)多肽抗原

EPHA4 Protein Human 重組人 EphA4 / HEK8 蛋白 (aa 570-986, His & GST 標簽)

IL21R重組大鼠 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 Protein

FLT4 Protein Mouse 重組小鼠 VEGFR3 / FLT-4 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

KLK8重組人 KLK-8 / Kallikrein-8 蛋白 Protein

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human neuraminidase (NA) ELISA Kit 人神經(jīng)酶(NA)檢測試劑盒

HumanleukocyteaigenE,HLA-EELISAKit 人類白細胞抗原E(HLA-E)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-hepatitisAvirusIgMaibody,ai-HAV檢測試劑盒人抗甲型肝病毒IgM抗體(ai-HAV)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物0酸葡萄糖酸脫氫酶(phosphogluconatedehydrogenase;PGD)電泳分析試劑盒5次

Humanverylowdensitylipoproteieceptor,VLDLRELISAKit人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠頸動脈內(nèi)皮細胞小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠胃泌素(mouse Gasin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠胰高血糖素樣肽-1(mouse GLP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝