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產(chǎn)品名稱:雞敗血支原體LAMP試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn):雞敗血支原體LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:-異腈萘:153.1832- ISO:10124-78-4 C11H7N3-氯-2-甲氧吡:143.573- chloride -2- a:13472-84-9 C6H6ClNO對(duì)氯酚Parachlorophenol:128.56 C6H5OCl:106-48-9藍(lán)Musk grass phenol blu
產(chǎn)品型號(hào):50次
更新日期:2021-02-20
訪問(wèn)次數(shù):450
50次雞敗血支原體LAMP試劑盒的詳細(xì)資料:
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 | 雞敗血支原體LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Mycoplasma gallisepticum |
規(guī)格 | 50次 |
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
5-溴-2-氟三氟甲:2435- -2- three f:393-37-3 C7H3BrF4
2,4-雙-(羥甲)*:180.242,4- bis - (Qiang Jiaji) three methyl benzene:29329-35-9 C11H16O2
1-乙酰咪唑:110.111- acetyl:2466-76-4 C5H6N2O
水合茚三酮Three indene ketone hydrate:178.14 C9H6O4:485-47-2
2-吡:104.112- cyanopyridine:100-70-9 C6H4N2
2-異腈萘:153.1832- ISO:10124-78-4 C11H7N
3-氯-2-甲氧吡:143.573- chloride -2- a:13472-84-9 C6H6ClNO
對(duì)氯酚Parachlorophenol:128.56 C6H5OCl:106-48-9
藍(lán)Musk grass phenol blue:466.59 C27H30O5S:76-61-9
雞敗血支原體LAMP試劑盒大鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 SURF4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 CEP68 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IFNA4 / Interferon alpha-4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 CDH16 / Cadherin-16 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 MARCO 基因全長(zhǎng)ORF克隆
重組小鼠 IL25 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人 IDO2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
食蟹猴 GFRA3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CD14 ELISA配對(duì)抗體
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