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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Annexin V-AbFluor•  488/PI Apoptosis Detection kit

產(chǎn)品中文名稱：488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

規(guī)格：50T/100T

貨號(hào)：EY-01X8544
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•AbFluor•  488 是FITC的替代物，不僅熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性更好，而且不受pH的影響

•  Annexin V- AbFluor•  488: Ex/Em = 491/517 nm; PI: Ex/Em = 535/617 nm (DNA染料)

•  適用于流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡

保存建議:-20℃，避光保存12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

細(xì)胞凋亡（apoptosis）是一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。在正?；罴?xì)胞中，磷脂酰（PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。膜聯(lián)蛋白V(Annexin V) 是一種分子量為35~36KDa的鈣離子依賴型磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。通過(guò)熒光素或者標(biāo)記Annexin V即可簡(jiǎn)單快速地直接檢測(cè)出細(xì)胞早期凋亡情況。 碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，而早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完好的，對(duì)PI有拒染性。但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染上。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。PI可以被488,532或546nm激光線激發(fā)，并發(fā)出紅色熒光。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine 0.5mgA/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine) A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白

IL21R Protein Human 重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

CDH1重組小鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

EFNB1 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

USP46重組人 / 小鼠 USP46 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽) Protein

豚鼠過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物酶(LPO)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LPO ELISA Kit

Human hepatitis D virus IgM (HDV IgM) ELISA Kit 人丁型肝IgM(HDV IgM)檢測(cè)試劑盒

Rabbitglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforbFGF(Humanbasicfibroblastgrowthfactor)ELISAKit人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子

細(xì)菌色酶原位染色檢測(cè)試劑盒20次

RabbitIerleukin10,IL-10ELISAKit兔子白介素10(IL-10)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA 試劑盒

Human visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)檢測(cè)試劑盒

Humanpan-cytokeratin,P-CKELISAKit 人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GuineapigGrowthhormone,GH檢測(cè)試劑盒豚鼠生長(zhǎng)激素(GH)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母酸性0酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mousec-fosELISAKit小鼠c-fos檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒DDR1重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

蛋白激酶Cδ(PKCδ)重組蛋白 Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd)

AHSP重組人 AHSP / ERAF 蛋白 Protein

IL21R Protein Human 重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

FGFR4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。