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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Huamn RANKL protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人核因子κ B受體活化因子配體RANKL

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8674
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

標(biāo)簽:無(wú)標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來(lái)源于人源： RANKL (Ala142-Asp317)（O14788）表達(dá)的蛋白片段，C-末端帶有 6×His 標(biāo)記。

活性:通過(guò)其在 RAW264.7 細(xì)胞中誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的能力來(lái)衡量。這種效應(yīng)的ED50<10 ng/mL。

蛋白長(zhǎng)度：該蛋白質(zhì)的計(jì)算分子量為 20.67 kDa，在還原條件下，蛋白質(zhì)遷移為 17 kDa（SDS-PAGE 分析）。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

采用 LAL 法檢測(cè)，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的動(dòng)?動(dòng)

背景

NF-κB 受體激活劑（RANK）配體（RANKL）是 TNF 細(xì)胞因子超家族中的 II 型跨膜蛋白，其細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域位于 TNF 細(xì)胞因子超家族的羧基端。RANKL 是一種 19.8 kDa 的蛋白質(zhì)，含有 317 個(gè)殘基，在 T 細(xì)胞和 T 細(xì)胞豐富的器官（如胸腺和淋巴結(jié)）中高表達(dá)。RANKL-RANK（RANKL 受體）在骨代謝、失調(diào)和免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Beta-Amyloid(1-16 0.5mgBeta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白)

ITGA5 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

CTLA4重組小鼠 CTLA4 / CD152 蛋白 Protein

ADAM17 Protein Rat 重組大鼠 ADAM17 蛋白

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽) Protein

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)檢測(cè)試劑盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCyclophosphamide,CTX檢測(cè)試劑盒人環(huán)0酰胺(CTX)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰質(zhì)病毒IgG(PV-IgG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人腸三葉因子(ITF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人Dickkopf1(DKK1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人11(KLK11)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人抑制素B(INH-B)ELISA 試劑盒

Human ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)檢測(cè)試劑盒

HumanDickkopf1,DKK1ELISAKit 人Dickkopf1(DKK1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanIerleukin11,IL-11檢測(cè)試劑盒人白介素11(IL-11)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織科薩基病毒A(CoxsackievirusA)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit人缺血修飾白蛋白(IMA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組人核因子κ B受體活化因子配體RANKLCTLA4重組小鼠 CTLA4 / CD152 蛋白 Protein

Beta-Amyloid(1-16 0.5mgBeta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽) Protein

ITGA5 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

ADAM17 Protein Rat 重組大鼠 ADAM17 蛋白