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產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產品英文名稱：Human GDF5 Protein

產品中文名稱：重組人生長分化因子5（GDF5）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8711
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

標簽:無標簽

表達宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人源GDF5 (Ala382-Arg501)(P43026)表達的蛋白片段。

蛋白長度：重組人 GDF5 由 120 個氨基酸組成，預計分子量為 13.5 kDa。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測

采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質中的 EU 含量小于 1.0。

產品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 50 mM NaCl 40 mM Tris-HCl, pH 8.0溶液。

基因ID:8200

使用中注意事項:開蓋使動?動

背景

人類 GDF-5 在胚胎發(fā)育過程中表達于長骨，出生后表達于關節(jié)軟骨。人類 GDF-5 基因突變與亨特-湯普森型侏儒癥和格雷比綜合癥有關，后者的特征是身材矮小、多指、四肢短小和畸形。成熟的功能型人 GDF-5 是由兩條 120 個氨基酸的多肽鏈（單體）通過一個二硫鍵連接而成的同源二聚體。重組人 GDF-5 是一種 27.0 kDa 的同源二硫鍵連接蛋白，由兩條 120 氨基酸的多肽鏈組成。

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
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操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環(huán)獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。