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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠腸黏膜上皮分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中最長的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng)。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠胃動蛋白1(GKN1)檢測試劑盒 ，英文名： GKN1 ELISA Kit

Mouse aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4(AQP-4)檢測試劑盒

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAkit 小鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhs-CRP(HumanhighsensitivityC-ReactiveProtein)ELISAKit人超敏C反應(yīng)蛋白

細胞NAD依賴性甘油-3-0酸脫氫酶(NAD-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NAD-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitBTC大鼠β細胞素

SEMA4D重組大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

FOXJ1/HFH-4 peptide 插頭蛋白J1抗原 0.5mgFOXJ1/HFH-4 peptide 插頭蛋白J1抗原

SULT1A1重組人 SULT1A1 / STP1 蛋白 Protein

GPX7 Protein Human 重組人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

EPHB4 Protein Mouse 重組小鼠 EphB4 / HTK 蛋白

FOXJ1/HFH-4 peptide 插頭蛋白J1抗原 0.5mgFOXJ1/HFH-4 peptide 插頭蛋白J1抗原

GPX7 Protein Human 重組人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SEMA4D重組大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

EPHB4 Protein Mouse 重組小鼠 EphB4 / HTK 蛋白

SULT1A1重組人 SULT1A1 / STP1 蛋白 Protein

小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人C(VC)檢測試劑盒

Humancalmodulin,CAMELISAKit 人鈣調(diào)素(CAM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanchemerin檢測試劑盒人chemerin檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米NK603品系試劑盒20次

Humanserineprotease，PRSSELISAKit人絲蛋白酶(PRSS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腸黏膜上皮細胞兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔壞死因子α（TNF-α）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔脂蛋白α(Lp-α)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝