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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

大鼠骨骼肌分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進行隨意運動。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個Z線之間的區(qū)段，叫做一個肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞，細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

致病性大腸桿菌(EPEC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

單增李斯特菌(LM)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

球菌(SA)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

甲型副氏菌(SPA)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒

Human ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)試劑盒

Porcineierleukin3,IL-3ELISAKit 豬白介素3(IL-3)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAhCGAb(Humanai-chorionicgonadoopin-aibody)ELISAKit人抗人絨毛膜抗體

血液牛病毒性腹瀉病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定量PCR擴增試劑盒20次

MouseTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKit小鼠壞死因子α(TNF-α)試劑盒

IFNAR1重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 Protein

IL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原 0.5mgIL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原

CNTF重組人 CNTF 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AIF1 Protein Human 重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白

IL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原 0.5mgIL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原

AIF1 Protein Human 重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IFNAR1重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 Protein

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白

CNTF重組人 CNTF 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA 試劑盒

Rat ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)試劑盒

Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISAKit 人糖化蛋白(GSP)試劑盒 進口分裝

HumanAlpha-fetoprotein,AFP試劑盒人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)試劑盒

植物半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

Monkeyβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒