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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎動(dòng)脈的分支為葉間動(dòng)脈，穿行于腎柱內(nèi)，上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處，形成與腎表面平行的弓狀動(dòng)脈。小葉間動(dòng)脈向被膜發(fā)出毛細(xì)血管，并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動(dòng)脈，進(jìn)入腎小囊后形成球形的毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯集成出球小動(dòng)脈，出腎小體。直小動(dòng)脈分支形成毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯合成直小靜脈，入弓狀靜脈、葉間靜脈，最后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎，注入下腔靜脈。腎動(dòng)脈既是腎的營養(yǎng)血管，又是腎的機(jī)能血管，與腎泌尿機(jī)能密切相關(guān)。腎動(dòng)脈在腎實(shí)質(zhì)內(nèi)形成兩個(gè)毛細(xì)血管網(wǎng)：腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較高，利于血漿濾過形成原尿；球后毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較低，利于腎小管的重吸收。腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是腎動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①在血漿濾過形成原尿的過程中起重要作用，②在腎小管的重吸收過程中起重要作用，③保持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CAMK2 ELISA Kit

Porcine gasin receptor (GsaR) ELISA Kit 豬促胃液素受體(GsaR)檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測(cè)試劑盒 48T

CLIAKitforMCP-3/CCL7ELISAKit大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3

體液腺苷酸環(huán)化酶(AdenylateCyclase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitCBH貓漢賽巴通體

MMP8重組小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a 0.5mgAgtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a) 血管組織血管緊張素Ⅱ1型受體抗原

ERP27重組人 ERP27 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD300A Protein Human 重組人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白

EDA2R Protein Rat 重組大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白

Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a 0.5mgAgtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a) 血管組織血管緊張素Ⅱ1型受體抗原

CD300A Protein Human 重組人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白

MMP8重組小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

EDA2R Protein Rat 重組大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白

ERP27重組人 ERP27 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat factor related apoptosis inducing ligand (FASL) ELISA Kit 大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測(cè)試劑盒

Humanα2-plasmininhititor,α2-PIELISAKit 人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor(MousemammarycarcinomaMarker-CA153)ELISAKit小鼠癌標(biāo)志物-CA153

飲料乙酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mouseierleukin8,IL-8ELISAKit小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠孕激素/孕(PROG)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠游離脂肪酸(FFA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝