產(chǎn)品名稱:大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)
產(chǎn)品特點:大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)公司正在出售的產(chǎn)品DKK1 Others Rhesus 恒河猴 DKK-1 / Dkk1 人細胞裂解液 SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 人細胞裂解液 SPARC Others Human 人 SPARC / Osteonectin 人細胞裂解液
產(chǎn)品型號:
更新日期:2024-12-11
訪問次數(shù):29
大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)的詳細資料:
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
細胞簡介:
大鼠外周血DC分離自外周血,由外周血單核細胞誘導而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導成的單核細胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導而成,多數(shù)呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導免疫應答,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應答,不能激活T細胞的信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞) | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Rat Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
方法簡介:
實驗室分離的大鼠外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的大鼠外周血樹突狀(未成熟DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣
傳代特性:屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠外周血樹突狀(未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1:2傳代 。
9.注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠S轉移酶θ1(GSTT1)檢測試劑盒 ,英文名: GSTT1 ELISA Kit
Porcine B cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit 豬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒
菌(VC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMIP-3Alpha/CCL20(HumanMacrophageInflammatoryProtein-3Alpha)ELISAkit人巨噬細胞性蛋白3α
體液精(arginine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitIL-18犬白介素18
IgG1重組人 IgG1-Fc 蛋白 (103 Cys/Ser) Protein
神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)重組蛋白 Recombinant Enolase, Neuron Specific (NSE)
RNF43重組人 RNF43 蛋白 Protein
CD4 Protein Human 重組人 CD4 / LEU3 蛋白
HA Protein H8N4 重組甲型流感 H8N4 (A/pintail duck/Alberta/114/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)重組蛋白 Recombinant Enolase, Neuron Specific (NSE)
CD4 Protein Human 重組人 CD4 / LEU3 蛋白
IgG1重組人 IgG1-Fc 蛋白 (103 Cys/Ser) Protein
HA Protein H8N4 重組甲型流感 H8N4 (A/pintail duck/Alberta/114/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
RNF43重組人 RNF43 蛋白 Protein
小鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human leukocyte aigen C (HLA-C) ELISA Kit 人類白細胞抗原C(HLA-C)檢測試劑盒
HumanL-phenylalanine,LPAELISAKit 人苯(LPA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
rabbitImmunoglobulinM,IgM檢測試劑盒兔子免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒規(guī)格:96T/48T
油菜樣品處理試劑盒20次
Mouseierferon-inducibleprotein10,IP-10ELISAKit小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)檢測試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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