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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

大鼠牙胚分離自牙胚組織；牙胚是牙齒開始發(fā)育階段的形態(tài)，是由牙板向深層的結(jié)締組織內(nèi)伸延，在其末端細(xì)胞增生，進一步發(fā)育成牙胚。牙胚有三部分組成：①成釉器（enamel organ），起源于口腔外胚層，形成釉質(zhì)；②牙乳頭（dental papilla），起源于外胚層間充質(zhì)，形成牙髓和牙本質(zhì)；③牙囊（dental sac），起源于外胚層間充質(zhì)，形成牙骨質(zhì)、牙周膜和固有牙槽骨。牙胚的發(fā)生是口腔上皮和外胚間充質(zhì)相互作用的結(jié)果。在胚胎的第5周，覆蓋在原口腔的上皮由兩層細(xì)胞組成，外層是扁平上皮細(xì)胞，內(nèi)層為矮柱狀的基底細(xì)胞。在未來的牙槽突區(qū)，深層的外胚層間充組織誘導(dǎo)上皮增生，開始僅在上下頜弓的特定點上，上皮局部增生，很快增厚的上皮相互連接，依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶，稱為原發(fā)性上皮帶。在胚胎的第7周，這一上皮帶繼續(xù)向深層生長，并分裂為兩個：向頰（唇）方向生長的上皮板稱前庭板，位于舌（腭）側(cè)的上皮板稱為牙板（dental lamina）。在胚胎的第8~10周，前庭板繼續(xù)向深層生長，與發(fā)育的牙槽嵴分開，前庭板表面上皮變性，形成口腔前庭溝。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠牙胚采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠牙胚經(jīng)檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK)檢測試劑盒 ，英文名： BRAK ELISA Kit

Pla gibberellic acid (GA) ELISA Kit 植物赤霉素(GA)檢測試劑盒

MouseCollageypeⅢ,ColⅢELISAKIT 小鼠Ⅲ型膠原(ColⅢ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanAi-ThrombinIII,AT-IIIELISAKit人抗Ⅲ抗體

細(xì)胞FES激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitBigET大鼠大內(nèi)皮素

TACSTD2重組人 TROP2 / TACSTD2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)重組蛋白 Recombinant Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)

GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein

CD69 Protein Human 重組人 CD69 蛋白

Spike Protein SARS 重組SARS Spike 蛋白 (Receptor Binding Domain, His 標(biāo)簽)

性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)重組蛋白 Recombinant Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)

CD69 Protein Human 重組人 CD69 蛋白

TACSTD2重組人 TROP2 / TACSTD2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

Spike Protein SARS 重組SARS Spike 蛋白 (Receptor Binding Domain, His 標(biāo)簽)

GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein

小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Hei Amy Ba aigen ELISA Kit 人痢疾內(nèi)阿米巴抗原檢測試劑盒

Humanprostacycline,PGIELISAKit 人前列環(huán)素(PGI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenadrenomedullin,ADM檢測試劑盒雞腎上腺髓質(zhì)素(ADM)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞AKT蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHya]uronatebindingprotein,HABPELISAKit小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠牙胚細(xì)胞小鼠血栓素檢測試劑盒   小鼠血栓素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血栓素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血栓素試劑盒、小鼠血栓素檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠血栓前體蛋白檢測試劑盒   小鼠血栓前體蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血栓前體蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血栓前體蛋白試劑盒、小鼠血栓前體蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠血清總補體檢測試劑盒   小鼠血清總補體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血清總補體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血清總補體試劑盒、小鼠血清總補體檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠血清淀粉樣蛋白檢測試劑盒   小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒、小鼠血清淀粉樣蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。