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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠牙齦上皮分離自牙齦組織；牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織，呈粉紅色、有光澤、質(zhì)堅(jiān)韌。牙齦邊緣稱為齦緣，正常呈月芽形。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突。也叫齒齦，通稱牙床；是指包住齒頸的黏膜組織，粉紅色，內(nèi)有很多血管和神經(jīng)。牙齦上皮長(zhǎng)期被認(rèn)為是抵御口腔中持續(xù)存在的細(xì)菌的被動(dòng)免疫屏障，隨著對(duì)牙周致病菌的不斷認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)牙齦上皮不僅僅是抵御微生物的物理屏障，上皮細(xì)胞還可以分泌抗菌多肽，參與先天性免疫。牙齦上皮作為牙周組織的道屏障，在抵御牙周炎細(xì)菌入侵的過程中發(fā)揮了重要作用，建立正常牙齦上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，將為各種牙齦上皮相關(guān)的研究提供穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙齦上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙齦上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： PAI1 ELISA Kit

Pisum sativum agglinin (PSA) ELISA Kit 豌豆凝集素(PSA)檢測(cè)試劑盒

MouseLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 小鼠白三烯B4(LTB4)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HSV-IIIgM單皰疹Ⅱ型病毒IgM(捕獲法，一步法)

細(xì)胞IGF-1R激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitALCAM大鼠白細(xì)胞活化黏附因子

LEFTY2重組人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

血管性血友病因子(vWF)重組蛋白 Recombinant Von Willebrand Factor (vWF)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

CD74 Protein Human 重組人 CD74 蛋白

GAG-P24 Protein HIV 重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype B, strain 92418)

血管性血友病因子(vWF)重組蛋白 Recombinant Von Willebrand Factor (vWF)

CD74 Protein Human 重組人 CD74 蛋白

LEFTY2重組人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

GAG-P24 Protein HIV 重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype B, strain 92418)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

小鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子(Smad1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat hepatic lipase (HL) ELISA Kit 大鼠肝脂酶(HL)檢測(cè)試劑盒

HumanAcidPhosphatase,ACPELISAKit 人酸性0酸酶(ACP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickenai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgA檢測(cè)試劑盒雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞APC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MouseHistoneDeacetylase,HDELISAKit小鼠組織蛋白去乙?；?span>(HD)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠牙齦上皮細(xì)胞小鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胰島素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T