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細(xì)胞簡介：

人表皮黑色素分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。黑色素細(xì)胞是皮膚產(chǎn)生和維持色素的主要細(xì)胞，起源于神經(jīng)嵴，后逐漸遷移到表皮和毛囊。黑色素細(xì)胞的異常或功能的失常導(dǎo)致了一系列難治性色素性疾病的發(fā)生，如、黃褐斑等。表皮黑色素細(xì)胞主要分布于位于表皮的基底層，與表皮細(xì)胞共同組成表皮黑素單位，其主要功能是產(chǎn)生黑素小體保護(hù)皮膚免受損害。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮黑色素先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮黑色素經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠核因子κB抑制蛋白α(IKB-α)試劑盒 96T/48T

Rat ovarian cancer marker-CA125 CA125 ELISA Kit 大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125 試劑盒

humanProstaglandinD2-methoxime,PGD2-MOXELISAKIT 人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-Nogo-Aaibody,NOGO-AAb試劑盒人NOGO-A抗體(Nogo-AAb)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物酸性0酸酶總活性比色法定量試劑盒20次

HumanUlaSensitivegrowthhormone,US-GHELISAKit人超敏生長激素(US-GH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

酸脫氫酶α(PDHα)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Alpha (PDHa)

CBFB重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白 Protein

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

PROCR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白

酸脫氫酶α(PDHα)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Alpha (PDHa)

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

PROCR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白

CBFB重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白 Protein

人表皮黑色素細(xì)胞大鼠抑制素B(INHB)試劑盒 ，英文名： INHB ELISA Kit

Mouse immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白M(IgM)試劑盒

MouseP-SelectinELISAkit 小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanDiphtheriaaibodyELISAKit人白喉抗體

細(xì)胞Akt/PKB激酶總活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitsmActinin-α大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。