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細胞簡介：

人口腔角質(zhì)形成分離自口腔組織；口腔黏膜在組織學形態(tài)上分為上皮、固有層和黏膜下層；口腔黏膜上皮細胞按是否參與角化被分為角質(zhì)形成細胞與非角質(zhì)形成細胞，主要由角質(zhì)形成細胞構(gòu)成；前者組成復層鱗狀上皮，后者游離分布于上皮層內(nèi)。根據(jù)在口腔內(nèi)部位的不同，復層鱗狀上皮可分為角化、不全角化或無角化型等幾類。以角化型上皮為例，由上皮的深面至淺面可分為基層、棘層、粒層及角化層等四層。

方法簡介：

實驗室分離的人口腔角質(zhì)形成采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的人口腔角質(zhì)形成經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人口腔角質(zhì)形成體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠補體C5a(C5a)檢測試劑盒 ，英文名： C5a ELISA Kit

Mouse alpha 2 aiplasmin (alpha 2-AP) ELISA Kit 小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)檢測試劑盒

ELISA 小鼠促紅細胞生成素(mouse EPO)  進口分裝

CLIAKitforKLK8(Humanurokinase-typeplasminogenactivator)ELISAKit人8

通用型鮑氏志賀菌Shigellaboydii試劑盒20次

ELISAKitHD大鼠組織蛋白去乙酰化酶

IL12RB2重組小鼠 IL12RB2 / IL12R-beta 2 蛋白 Protein

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J 0.5mgApo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原

SHH重組人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 198-462, His 標簽) Protein

HTRA2 Protein Human 重組人 HTRA2 / OMI 蛋白

REG4 Protein Rat 重組大鼠 REG4 蛋白 (Fc 標簽)

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J 0.5mgApo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原

HTRA2 Protein Human 重組人 HTRA2 / OMI 蛋白

IL12RB2重組小鼠 IL12RB2 / IL12R-beta 2 蛋白 Protein

REG4 Protein Rat 重組大鼠 REG4 蛋白 (Fc 標簽)

SHH重組人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 198-462, His 標簽) Protein

小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat iercellular adhesion molecule 2 (ICAM-2/CD102) ELISA Kit 大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)檢測試劑盒

Humanangiotensinogen,aGTELISAKit 人血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCompleme7,C7檢測試劑盒人補體7(C7)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPulmonarysurfatca-associatedproteinA，SP-AELISAKit人肺表面活性物質(zhì)相關蛋白A(SP-A)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人口腔角質(zhì)形成細胞兔兒茶酚胺(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔交聯(lián)物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔交聯(lián)物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。