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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞

英文名稱：Human Choroidal Vascular Endothelial Cells

組織來(lái)源：脈絡(luò)膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來(lái)的外力的沖擊作用通過(guò)玻璃體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時(shí)對(duì)視覺(jué)系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺(jué)神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營(yíng)養(yǎng)和遮光作用。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠抗酸性0酸酶(ACP5)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： ACP5 ELISA Kit

Monkey glial fibrillary acidic protein (GFAP) ELISA Kit神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)檢測(cè)試劑盒

RaeninELISAKit 大鼠腎素(Renin)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFree-T3(MouseFreei-iodothyronineIndes)ELISAKit小鼠游離三甲狀腺原

細(xì)胞活化10(FACTORXa)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratplaceagrowthfactor,PLGFELISAKit大鼠胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

S100B重組小鼠 S100B / S100beta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

端粒酶關(guān)聯(lián)蛋白1(TEP1)重組蛋白 Recombinant Telomerase Associated Protein 1 (TEP1)

DDR2重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 Protein

IGJ Protein Human 重組人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白

IL17RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

白蛋白(ALB)天然蛋白 Native Albumin (ALB)

IGJ Protein Human 重組人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白

TCN2重組小鼠 TCN2 / Transcobalamin-II 蛋白 Protein

IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

B3GNT2重組人 B3GNT2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

豚鼠血清(NO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat signal ansduction molecule 1 (Smad1) ELISA Kit 大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子1(Smad1)檢測(cè)試劑盒

Humanendomorphin-2,EM-2ELISAKit 人內(nèi)肽-2(EM-2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCryoglobulin,CG檢測(cè)試劑盒人冷球蛋白(CG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織D-乳酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

humanProstaglandinD2-methoxime,PGD2-MOXELISAKit人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子 (Eotaxin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) Biosource

Human Eotaxin-2/MPIF-2/CCL24   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) R&D

Human Eotaxin-3/CCL26   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) R&D

促紅細(xì)胞生成素 (EPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國(guó) DRG

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用