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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

英文名稱：Human Brain Microvascular Endothelial Cells

組織來(lái)源：腦組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

人腦微血管內(nèi)皮分離自腦組織；腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。其主要特征如下：①腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細(xì)胞旁的通量；②腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低；③腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對(duì)稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化"的表現(xiàn)型。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠AMPA離子能谷酸受體1(GRIA1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： GRIA1 ELISA Kit

Human VLA (VLA) ELISA Kit 人遲現(xiàn)抗原(VLA)檢測(cè)試劑盒

GoatIerferonγ,IFN-γELISAKit 山羊γ干擾素(IFN-γ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforC3bR(HumanComplemefragme3brccptor)ELISAKit人補(bǔ)體片段3b受體

細(xì)菌脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

rabbitthrombomodulin,TMELISAKit兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL12B重組人 IL12B / P40 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)重組蛋白 Recombinant Eosinophil Chemotactic Factor (ECF)

MMP26重組人 MMP-26 / Matrix metalloproteinase-26 蛋白 Protein

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)重組蛋白 Recombinant Eosinophil Chemotactic Factor (ECF)

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

IL12B重組人 IL12B / P40 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

MMP26重組人 MMP-26 / Matrix metalloproteinase-26 蛋白 Protein

豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat androstene two ketone (ASD) ELISA Kit 大鼠雄(ASD)檢測(cè)試劑盒

Humanβ2-Glycoprotein1aibodyIgA,β2-GP1AbIgAELISAKit 人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1AbIgA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCXC-chemokinereceptor1,CXCR1檢測(cè)試劑盒人CXC趨化因子受體1(CXCR1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織ERK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanprocollagenⅢN-terminalpeptide，PⅢELISAKit人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞人組織轉(zhuǎn)谷酰胺酶(TGM2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TGM2 (ansglaminase 2, Tissue) ELISA Kit

人表皮轉(zhuǎn)谷酰胺酶(TGM3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TGM3 (ansglaminase 3, Epidermal) ELISA Kit

人白介素27(IL-27)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human IL-27 (Ierleukin 27) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGF-β3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TGF-β3 (ansforming Growth Factor β3) ELISA Kit

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用