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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人直腸黏膜上皮分離自直腸組織；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi)。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈，下端以門而終。直腸上端的大小似結(jié)腸，其下端擴大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，下端變細接管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。

方法簡介：

公司實驗室分離的人直腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人直腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠熱休克轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)檢測試劑盒 ，英文名： HSF4 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor B (VEGF-B) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子B(VEGF-B)檢測試劑盒

RatAquaporin1,AQP-1ELISAKit 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGuineapigovalbuminspecificIgG,OVAsIgGELISAKit豚鼠卵清蛋白特異性IgG

細胞長鏈脂酰合成酶(ACYLCOASYHETASE)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次

Ratulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL1B重組大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽) Protein

HO-2(Heme oxygenase 2 0.5mgHO-2(Heme oxygenase 2) 血紅素氧合酶-2抗原

SGK3重組人 SGK3 / SGKL 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CLEC6A Protein Human 重組人 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL1R1 Protein Mouse 重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白

HO-2(Heme oxygenase 2 0.5mgHO-2(Heme oxygenase 2) 血紅素氧合酶-2抗原

CLEC6A Protein Human 重組人 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL1B重組大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽) Protein

IL1R1 Protein Mouse 重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白

SGK3重組人 SGK3 / SGKL 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠雙氫睪酮(DHT)ELISA 試劑盒 96T/48T

Measles virus (MV) ELISA Kit 人麻疹病毒(MV)檢測試劑盒

Humansolublemyosinheavychain1,sMHC-1ELISAKit 人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

DuckIerleukin6,IL-6檢測試劑盒鴨白介素6(IL-6)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

棗椰樹(datepalm)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

MouseDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISAKit小鼠脫氫表雄同S7(DHEA-S7)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人直腸黏膜上皮細胞小鼠神經(jīng)營養(yǎng)素4   英文名稱：   Neuroophin-4   規(guī)格：      英文縮寫：   -4

小鼠神經(jīng)酸酶   英文名稱：   Mouse Neidase   規(guī)格：      英文縮寫：   NEU

小鼠8羥基脫氧鳥苷   英文名稱：   Mouse 8-hydroxy-2'-desoxyguanosine   規(guī)格：      英文縮寫：   8-OHDG

小鼠嗅素4   英文名稱：   Mouse Olfactomedin 4   規(guī)格：      英文縮寫：   OLFM4