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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人子宮成纖維細(xì)胞

英文名稱：Human Uterine Fibroblast Cells

組織來源：子宮組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

人子宮成纖維分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會(huì)陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時(shí)，可以引起子宮脫垂。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的子宮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。子宮成纖維細(xì)胞的主要特征：①是子宮的重要細(xì)胞組成，在體外易于培養(yǎng)；②在子宮損傷后能修復(fù)和重塑子宮；③在子宮炎癥時(shí)能有效控制炎癥擴(kuò)散。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

小鼠型纖溶酶原激活物受體   英文名稱：   urokinase-plasmingen activator receptor   規(guī)格：      英文縮寫：   uPA-R

小鼠超敏感度促甲狀腺素   英文名稱：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   U.TSH

線粒體解偶聯(lián)蛋白2   英文名稱：   Mouse Mitochondrial Uncoupling Protein 2   規(guī)格：      英文縮寫：   UCP2

小鼠血管細(xì)胞粘附分子-1   英文名稱：   vascuiar endothelial cells adhesion molecule 1   規(guī)格：      英文縮寫：   VCAM-1

小鼠絨毛膜β(β-CG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human brain g peptide (BGP/Gehrelin) ELISA Kit 人腦腸肽(BGP/Gehrelin)試劑盒

Humanvionectin,VELISAKit 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapigImmunoglobulinA,IgA試劑盒豚鼠免疫球蛋白A(IgA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量試劑盒20次

Mousecardioophln1,CT-1ELISAKit小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD200重組人 CD200 / OX-2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)重組蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)

PSMA3重組人 PSMA3 / Proteasome 20S alpha 3 蛋白 Protein

CPB2 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白

NP Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP)

粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)重組蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)

CPB2 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白

CD200重組人 CD200 / OX-2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

NP Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP)

PSMA3重組人 PSMA3 / Proteasome 20S alpha 3 蛋白 Protein

人子宮成纖維細(xì)胞大鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶4(NOX4)試劑盒 ，英文名： NOX4 ELISA Kit

Mouse thrombopoietin (TPO) ELISA Kit 小鼠血小板生成素(TPO)試劑盒

RatcoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 大鼠Ⅹ(FⅩ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGM1(Humanai-gangliosideaibody)ELISAKit人抗抗體

細(xì)胞二脂酰甘油(DAG)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次

RatSubstanceP,SPELISAKit大鼠P物質(zhì)(SP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用