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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔骨骼肌成纖維細(xì)胞

英文名稱：Rabbit Skeletal Muscle Fibroblast Cells

組織來源：骨骼肌

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔骨骼肌分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段，叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞，細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性。

實(shí)驗(yàn)室分離的tu骨骼肌成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨骼肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔骨骼肌成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。

小鼠癌標(biāo)志物CA125ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human platelet aibody IgG/M/A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)試劑盒

Humandeubiquitinatingenzyme,DUBELISAKit 人泛素分解酶(DUB)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforABP(HumanAndrogenBindingProtein)ELISAKit人雄激素結(jié)合蛋白

合成酶(NOS)總活性終點(diǎn)比色法定量試劑盒50/100次

MouseN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKit小鼠N端前腦素(-proBNP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H15N2 (A/Australian shelduck/Western Australia/1756/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子 0.5mgPAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子

ICOSLG重組人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 Protein

ESM1 Protein Human 重組人 ESM1 / Endocan 蛋白

ANGPT2 Protein Human 重組人 Angiopoietin-2 / ANG2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子 0.5mgPAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子

ESM1 Protein Human 重組人 ESM1 / Endocan 蛋白

HA重組甲型流感 H15N2 (A/Australian shelduck/Western Australia/1756/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ANGPT2 Protein Human 重組人 Angiopoietin-2 / ANG2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ICOSLG重組人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 Protein

兔骨骼肌成纖維細(xì)胞大鼠酶原顆粒膜糖蛋白(GP2)試劑盒 ，英文名： GP2 ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor 2 (IGF-2) ELISA Kit 小鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)試劑盒

RatAmylinELISAKit 大鼠胰淀素(Amylin)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGelsolinELISAKit大鼠凝溶膠蛋白

細(xì)胞甘油三酯(iglyceride)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次

Ratsolubleclusterofdiffereiation14,sCD14ELISAKit大鼠可溶性CD14(sCD14)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用