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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔肌源性干細(xì)胞

英文名稱：Rabbit Myogenic Stem Cells

組織來(lái)源：骨骼肌組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔肌源性干分離自肌肉組織；肌源性干細(xì)胞（MDSCs）屬于成體多能干細(xì)胞，具有多細(xì)胞系分化和自我更新能力。通過(guò)誘導(dǎo)刺激，MDSCs可以分化為脂肪、骨骼、軟骨、平滑肌和神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞和組織類型；作為基因治療和組織工程的供體細(xì)胞，已成為治療心肌梗死、Duchenne氏肌營(yíng)養(yǎng)不良等疾病的研究熱點(diǎn)；近年來(lái)，肌源性干細(xì)胞在治療尿失禁等方面的應(yīng)用逐步得到重視。需注意的是，肌源性干細(xì)胞主要存在于骨骼肌組織中，只是成熟組織的很少部分細(xì)胞；平時(shí)處于靜止?fàn)顟B(tài)，在細(xì)胞應(yīng)激和組織缺失時(shí)才會(huì)激活；并且隨著年齡的增加，所含細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，而目前臨床疾病的治療主要是針對(duì)成體進(jìn)行。肌源性干細(xì)胞的體外擴(kuò)增對(duì)細(xì)胞移植和干細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療至關(guān)重要。對(duì)肌源性干細(xì)胞的擴(kuò)增研究發(fā)現(xiàn)，EGF、FGF-2和SCF可以通過(guò)減數(shù)分裂或促使不分裂細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂周期，從而刺激細(xì)胞增生。更重要的是，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的體外擴(kuò)增可以通過(guò)自我更新不刺激細(xì)胞分化，從而保持干細(xì)胞表型。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肌源性干采用膠原酶--聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心、差速貼壁法，后通過(guò)肌源性干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肌源性干經(jīng)Sca-1免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠垂草扁桃酸(VMA)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： VMA ELISA Kit

Mouse 6 keto prostaglandin (6-K-PG) ELISA Kit 小鼠6酮前列腺素(6-K-PG)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠環(huán)0酸鳥苷(mouse cGMP)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLF/LTFAb-Ig(HumanLactoferrinaibodyIgG)ELISAkit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG

通用型HRP-AEC底物顯色試劑盒10次

ELISAKitCollagenaseI膠原酶I

PVR重組小鼠 CD155 / PVR 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

CK7(Cytokeratin 7 0.5mgCK7(Cytokeratin 7)human 細(xì)胞角蛋白7抗原

TSC22D1重組人 TSC22D1 蛋白 Protein

IFNA7 Protein Human 重組人 Interferon alpha 7 / IFNA7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SCARB1 Protein Mouse 重組小鼠 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 蛋白

CK7(Cytokeratin 7 0.5mgCK7(Cytokeratin 7)human 細(xì)胞角蛋白7抗原

IFNA7 Protein Human 重組人 Interferon alpha 7 / IFNA7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PVR重組小鼠 CD155 / PVR 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

SCARB1 Protein Mouse 重組小鼠 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 蛋白

TSC22D1重組人 TSC22D1 蛋白 Protein

小鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human gasin (Gasin) ELISA Kit 人胃泌素(Gasin)檢測(cè)試劑盒

Humanandrogeeceptor,ARELISAKit 人雄激素受體(AR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancoicoopin-releasingfactor,CRF人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CK2α激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanproteinkinaseC，PKCELISAKit人蛋白激酶C(PKC)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔肌源性干細(xì)胞土壤堿性蛋白酶   可見分光光度法   50管/24樣

FDA水解酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣

土壤酸性蛋白酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣

土壤漆酶測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用