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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來(lái)的外力的沖擊作用通過(guò)玻璃體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時(shí)對(duì)視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營(yíng)養(yǎng)和遮光作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 試劑盒

Human vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 人2(VD2)檢測(cè)試劑盒

HumanpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit 人相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanchlamydialprotease-likeactivityfactor,CPAF檢測(cè)試劑盒人衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

桌面DNA清除溶液500毫升

Humansecretorycompone,SCELISAKit人分泌成分(SC)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

SPOCK1重組人 SPOCK1 / Testican 1 蛋白 (aa 21-429, His 標(biāo)簽) Protein

SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine 0.5mgSPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 富含半胱的酸性分泌蛋白抗原

CD36重組人 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

IL2 Protein Human 重組人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A)

RBP4 Protein Human 重組人 RBP4 蛋白

SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine 0.5mgSPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 富含半胱的酸性分泌蛋白抗原

IL2 Protein Human 重組人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A)

SPOCK1重組人 SPOCK1 / Testican 1 蛋白 (aa 21-429, His 標(biāo)簽) Protein

RBP4 Protein Human 重組人 RBP4 蛋白

CD36重組人 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bromodeoxyuridine (BrdU) ELISA Kit 大鼠溴脫氧核苷尿(BrdU)檢測(cè)試劑盒

HumanPemphigusFoliaceus,PFELISAKit 人落葉型天皰瘡抗體(PF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancyclicadenosinemonophosphate,cAMP檢測(cè)試劑盒人環(huán)0酸腺苷(cAMP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織FES激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanProcalcitonin，PCTELISAKit人降鈣素原(PCT)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞人組織蛋白去乙?；笝z測(cè)試劑盒   人組織蛋白去乙?；冈噭┖?span>   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白去乙?；冈噭┖?、人組織蛋白去乙?；笝z測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人組織蛋白酶抗體檢測(cè)試劑盒   人組織蛋白酶抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶抗體試劑盒、人組織蛋白酶抗體檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人組織蛋白酶K檢測(cè)試劑盒   人組織蛋白酶K試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶K試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶K試劑盒、人組織蛋白酶K 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人組織蛋白酶D檢測(cè)試劑盒   人組織蛋白酶D試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶D試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶D試劑盒、人組織蛋白酶D 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。