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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔腦微血管內(nèi)皮細胞

英文名稱：Rabbit Brain Microvascular Endothelial Cells

組織來源：腦

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

兔腦微血管內(nèi)皮分離自腦組織；腦微血管內(nèi)皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細胞等從血液進入大腦，大腦微血管內(nèi)皮細胞與外周內(nèi)皮細胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。與外周內(nèi)皮細胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細胞表面表達細胞粘附分子，調(diào)控白細胞進入大腦。由于微血管內(nèi)皮細胞的器官特異性，內(nèi)皮細胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。其主要特征如下：①腦微血管內(nèi)皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細胞旁的通量；②腦微血管內(nèi)皮細胞缺乏內(nèi)皮細胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低；③腦微血管內(nèi)皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化"的表現(xiàn)型。

實驗室分離的兔腦微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔腦微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腦微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結(jié)合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

山羊免疫球蛋白A   英文名稱：   Immunoglobulin A   規(guī)格：      英文縮寫：   IgA

山羊   英文名稱：   Coisol   規(guī)格：      英文縮寫：   CO

山羊β   英文名稱：   β-Hydroxybyrate   規(guī)格：      英文縮寫：   Β-OHB

山羊胰島素   英文名稱：   lnsulin   規(guī)格：      英文縮寫：   INS

豚鼠前列腺素E2(PGE2)試劑盒 ，英文名： PGE2 ELISA Kit

Human cytokeratin low molecular weight (CK-LMW) ELISA Kit 人低分子量細胞角蛋白(CK-LMW)試劑盒

Monkeybrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit腦素/腦尿肽(BNP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBKELISAKit大鼠血管舒緩激肽

細菌尿肉湯500毫升

Rabbitleoopichormone,LHELISAKit兔子促黃體激素(LH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2 0.5mgPMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2) 周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗原

SERPINE1重組人 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 Protein

IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 標簽)

PMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2 0.5mgPMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2) 周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗原

IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白

HA重組甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 標簽)

SERPINE1重組人 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 Protein

兔腦微血管內(nèi)皮細胞大鼠可溶性CD80(sCD80/B7-1)試劑盒 ，英文名： sCD80/B7-1 ELISA Kit

Mice colorectal cancer aigen (CCA) ELISA Kit 小鼠結(jié)腸癌抗原(CCA)試劑盒

MouseCathepsinK,cath-KELISAKit 小鼠組織蛋白酶K(cath-K)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanparathyroidhormone-likeprotein,PLPELISAKit人甲狀旁腺激素樣蛋白

同位素RNA北方雜交試劑盒5次

ELISAKitPL-A2大鼠0脂酶A2

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用