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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠骨外膜分離自骨外膜組織；骨外膜是指成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞緊貼骨密質(zhì)外面包著的那層膜；在骨外膜和骨內(nèi)膜中含有一種能夠生成骨的細(xì)胞，稱為成骨細(xì)胞，這種細(xì)胞具有使骨骼生長(zhǎng)的功能。在骨外膜中還有另外一種專門破壞骨細(xì)胞的細(xì)胞，稱為破骨細(xì)胞。這兩種細(xì)胞作用相反又相互依據(jù)。成骨細(xì)胞像建筑工人，不停地生成新的骨組織，破骨細(xì)胞則像維修工人，不停地清除老化、死亡、破碎的骨結(jié)構(gòu)，并且還負(fù)責(zé)拆除“違章建筑"，就是除去不需要的多余的骨組織，從而使骨的整體結(jié)構(gòu)更符合生物力學(xué)的需要。正常情況下，兩種細(xì)胞之間處于動(dòng)態(tài)的平衡之中，完成骨的生長(zhǎng)發(fā)育的新陳代謝。骨折之后，成骨細(xì)胞先啟動(dòng)，從而促使新骨痂的生成，即骨折的愈合。但是，股痂只是恢復(fù)了骨的連續(xù)性，往往不符合生物力學(xué)的需要，改建塑形的過程則必須有破骨細(xì)胞的參與才能完成。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨外膜采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨外膜經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠骨外膜體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠腫瘤蛋白p53(TP53)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： TP53 ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 30 (sCD30) ELISA Kit 小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30(sCD30)檢測(cè)試劑盒

MouseE-SelectinELISAkit 小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit樣轉(zhuǎn)錄體受體

微型RNA文庫(kù)數(shù)據(jù)庫(kù)(在建)會(huì)員制

ELISAKitADAM8大鼠解整合素樣金屬蛋白酶8

CPA2重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

內(nèi)分泌腺來源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)重組蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

CSNK1G1 Protein Human 重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

內(nèi)分泌腺來源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)重組蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

CSNK1G1 Protein Human 重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CPA2重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

小鼠受體()ELISA 試劑盒 96T/48T

Human coagulation factor XIII (F XIII) ELISA Kit 人ⅩⅢ(FⅩⅢ)檢測(cè)試劑盒

Humananspoerassociatedwithaigenprocessing,TAPELISAKit 人抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human2,3-dinohromboxaneB2,2,3-dinor-TXB2檢測(cè)試劑盒人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞樣品氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次

Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠骨外膜細(xì)胞小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體(sCD30L)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30(sCD30)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。