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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠尿道平滑肌分離自尿道管組織；尿道是從膀胱通向體外的管道。起自膀胱的尿道內(nèi)口，止于尿道外口，行程中通過(guò)前列腺部、膜部和陰莖海綿體部，尿道在尿道膜部有一環(huán)橫行紋肌構(gòu)成的括約肌，稱為尿道外括約肌，由意識(shí)控制。尿道有三個(gè)解剖上的較狹部和膨大部，前者分別位于外口、膜部和內(nèi)口，后者位于舟狀窩、球部和前列腺部。尿道壁為粘膜層、粘膜下層和肌肉層所組成。在前尿道的外面，還包有豐富的彈力纖維和平滑肌纖維的尿道海綿體。尿道粘膜上皮在前列腺部為移行上皮(近膀胱部)，一部分為多列或復(fù)層柱狀上皮，在有尿道海綿體的一部分尿道，主要為復(fù)層柱狀上皮，在皺襞上也有單層柱狀上皮。特別在舟狀窩內(nèi)有許多環(huán)狀細(xì)胞，舟狀窩的遠(yuǎn)端部開(kāi)始有未角化的復(fù)層鱗狀上皮。粘膜下層血液供應(yīng)豐富，主要為結(jié)締組織。肌肉層有縱行肌和外環(huán)形肌。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠尿道平滑肌采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠尿道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠尿道平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠γ(FGγ)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： FGγ ELISA Kit

Mouse pregnancy associated plasma protein A (PAPP-A) ELISA Kit 小鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)檢測(cè)試劑盒

Mousebasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit 小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumanadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit人促腎上腺皮質(zhì)激素

細(xì)胞HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitC4大鼠補(bǔ)體蛋白4

ACBD7重組人 ACBD7 蛋白 Protein

Snake poison Protein 蛇毒蛋白 0.5mgSnake poison Protein 蛇毒蛋白

MET重組人 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白

PCSK9 Protein Human 重組人 PCSK9 / NARC1 蛋白

Snake poison Protein 蛇毒蛋白 0.5mgSnake poison Protein 蛇毒蛋白

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白

ACBD7重組人 ACBD7 蛋白 Protein

PCSK9 Protein Human 重組人 PCSK9 / NARC1 蛋白

MET重組人 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

小鼠泌乳素(PL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glucokinase (GCK) ELISA Kit 人葡萄糖激酶(GCK)檢測(cè)試劑盒

HumanAgrinELISAKit 人聚集蛋白(Agrin)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAcrineOrange,AO檢測(cè)試劑盒人橙(AO)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)試劑盒20次

MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠尿道平滑肌細(xì)胞小鼠抗IVIgG抗體ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。