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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

小鼠膀胱上皮分離自膀胱組織；膀胱是一個(gè)儲(chǔ)尿器官，在哺乳類動(dòng)物，它是由平滑肌組成的一個(gè)囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi)，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）。其主要作用有：①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞，進(jìn)而影響腎臟病變。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠膀胱移行上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠膀胱移行上皮經(jīng)Cytokeratin-AE1/AE3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠內(nèi)皮素2(EDN2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： EDN2 ELISA Kit

Mouse platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測(cè)試劑盒

RatGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 大鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGIP(Humangasicinhibitorypolypeptide)ELISAKit人胃抑素

細(xì)胞脯肽酶(prolidase;PLD)紫外比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

SLAMF8重組小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 Protein

Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase 0.5mgAlpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

BST1 Protein Rat 重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白

胞外5'-核苷酸酶(NT5E)重組蛋白 Recombinant 5'-Nucleotidase, Ecto (NT5E)

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

ST6GALNAC2重組小鼠 STHM / ST6GALNAC2 蛋白 Protein

CD53 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, Fc 標(biāo)簽)

EBAG9重組人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 Protein

小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glucokinase regulatory protein (GKRP) ELISA Kit 人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)檢測(cè)試劑盒

HumanhepatitisBvirusXieractingprotein,HBXIPELISAKit 人乙型肝病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫa檢測(cè)試劑盒人活化Ⅻ(FⅫa)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

脂肪氧化酶(lipoxygenase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠膀胱移行上皮細(xì)胞小鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白5(MIP-5)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝