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細胞簡介：

兔腹膜間皮分離自腹膜組織；腹膜是存在于高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜，主要由間皮細胞構(gòu)成，藉由結(jié)締組織的支持所形成的一層膜狀組織。腹膜包覆大部分腹腔內(nèi)的器官，能分泌黏液潤濕臟器的表面，減輕臟器間的摩擦。腹腔臟器的血液、淋巴和神經(jīng)組織經(jīng)由腹膜與外界相連；腹膜也具有吸收撞擊保護內(nèi)臟的效果。腹膜（peritoneum）為全身面積大、配布復(fù)雜的漿膜，由皮及少量結(jié)締組織構(gòu)成，薄而光滑，呈半透明狀。襯于腹、盆腔壁內(nèi)表面的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層；覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜臟層。臟腹膜與壁腹膜互相延續(xù)、移行，共同圍成不規(guī)則的潛在性腔隙，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity）。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙。腹膜腔內(nèi)有少量漿液，在臟器活動時可減少摩擦。腹膜間皮細胞屬于上皮組織中的單層扁平上皮，是覆蓋于腹膜表面的一層細胞。間皮細胞是構(gòu)成間皮的細胞，正常大小約為15-25微米，細胞常呈圓形或者卵圓形。其功用是提供潤滑，使器官與器官、器官與胸膜與腹膜間都能得到良好的保護，不會互相磨損受傷。而間皮所生產(chǎn)的潤滑和保護作用就是靠間皮細胞所分泌的物質(zhì)來達成，分泌物多半為細胞外基質(zhì)、玻尿酸類物質(zhì)。

方法簡介：

實驗室分離的兔腹膜間皮采用混合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔腹膜間皮經(jīng)PCK、Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腹膜間皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒 ，英文名： TGFβ1 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)檢測試劑盒

MouseActivinAELISAKit 小鼠活化素A(Activin-A)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumankeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit人角化細胞內(nèi)分泌因子

微粒體S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次

大鼠抗IgE受體抗體ELISAKit大鼠抗IgE受體抗體ELISAKit，大鼠抗IgE受體抗體ELISAKit，

LGALS1重組大鼠 Galectin-1 / LGALS1 蛋白 Protein

FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2 0.5mgFGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) 成纖維細胞生長因子受體2抗原

CSTA重組人 Cystatin A / CSTA 蛋白 Protein

HFE2 Protein Human 重組人 Hemojuvelin / HFE2 蛋白

LXN Protein Mouse 重組小鼠 LXN / Latexin 蛋白

FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2 0.5mgFGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) 成纖維細胞生長因子受體2抗原

HFE2 Protein Human 重組人 Hemojuvelin / HFE2 蛋白

LGALS1重組大鼠 Galectin-1 / LGALS1 蛋白 Protein

LXN Protein Mouse 重組小鼠 LXN / Latexin 蛋白

CSTA重組人 Cystatin A / CSTA 蛋白 Protein

小鼠P物質(zhì)(SP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat glucocoicoid receptor (GR) ELISA Kit 大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)檢測試劑盒

Human17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit 人17羥孕酮(17-OHP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumancoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-Ag檢測試劑盒人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白脫乙?；?span>8(HDAC8)活性比色法定量檢測試劑盒20次

humaESTcorepressor3,RCOR3ELISAKit人REST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔腹膜間皮細胞兔熱休克蛋白40(HSP-40)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔熱休克蛋白20(HSP-20)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔固（ALD）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔去甲上腺素(NA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。