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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：兔角膜上皮細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Rabbit Corneal Epithelial Cells

組織來(lái)源：角膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔角膜上皮分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒(méi)有血管，透過(guò)外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下：①角膜是的無(wú)血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細(xì)胞層，外層即是上皮細(xì)胞；②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段，常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長(zhǎng)因子和藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔角膜上皮采用混合膠原酶消化結(jié)合上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔角膜上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

嗜酸粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)液   Product name said

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)液   Alkaline phosphatase stain

   Acid phosphatase stain

尿蛋白定性測(cè)試盒   Acid esterase stain

豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)試劑盒 ，英文名： SAA ELISA Kit

Human proteinase 3 specific ai neuophil cytoplasmic aibody (PR3-ANCA) ELISA Kit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)試劑盒

Monkeyfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit促卵泡素(FSH)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBMP-2ELISAKit大鼠骨成型蛋白2

細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠法定量試劑盒20次

Rabbitmaixmetalloproteinase1,MMP-1ELISAKit兔基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

MARCO重組小鼠 MARCO 蛋白 Protein

CD122/IL-2RB(Imterleukm-2 Receptor beta 0.5mgCD122/IL-2RB(Imterleukm-2 Receptor beta) CD122/白介素2受體β鏈抗原

STAT4重組人 STAT4 蛋白 Protein

IGSF11 Protein Human 重組人 IGSF11 / BTIGSF 蛋白

OLR1 Protein Rat 重組大鼠 OLR1 / LOX1 蛋白

CD122/IL-2RB(Imterleukm-2 Receptor beta 0.5mgCD122/IL-2RB(Imterleukm-2 Receptor beta) CD122/白介素2受體β鏈抗原

IGSF11 Protein Human 重組人 IGSF11 / BTIGSF 蛋白

MARCO重組小鼠 MARCO 蛋白 Protein

OLR1 Protein Rat 重組大鼠 OLR1 / LOX1 蛋白

STAT4重組人 STAT4 蛋白 Protein

兔角膜上皮細(xì)胞大鼠利肽受體1(NPR1)試劑盒 ，英文名： NPR1 ELISA Kit

Monkey follicle stimulating hormone (FSH) ELISA Kit促卵泡素(FSH)試劑盒

RatIerferonα,IFN-αELISAKit 大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGABA(MouseGamma-aminobyricacid)ELISAKit小鼠γ氨基

細(xì)胞過(guò)氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性化學(xué)發(fā)光法定量試劑盒20次

RatProinsulin,PIELISAKit大鼠胰島素原(PI)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用