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細胞簡介：

小鼠肺微血管內(nèi)皮分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng)。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內(nèi)皮細胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動具有重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肺微血管內(nèi)皮采用組織貼塊法并結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠肺微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬白介素2(IL-2)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1β(IL-1β)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1α(IL-1α)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA 試劑盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 8 (ADAM8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒

Porcineniicoxide,NOELISAKit 豬血清(NO)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha2-PI(HumanAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纖溶酶抑制物

血液酪酶(tyrosinase)活性比色法定量試劑盒20次

NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit裸鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)試劑盒

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠?jīng)毒素(35肽)

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠?jīng)毒素(35肽)

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)試劑盒 ，英文名： PPARγC1α ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin F1a (6-keto-PGF1a) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)試劑盒

RatAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforeNOSELISAKit大鼠內(nèi)皮型合成酶

細胞氯乙?；D(zhuǎn)移酶(CAT)報告基因活性同位素薄層色譜(TLC)試劑盒20次

RatLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit大鼠鉤端IgG(LepIgG)試劑盒

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。