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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠外周血中性粒分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。白細(xì)胞是一類無(wú)色、球形、有核的血細(xì)胞。白細(xì)胞不是一個(gè)均一的細(xì)胞群，根據(jù)其形態(tài)、功能和來(lái)源部位可以分為三大類：粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，其中粒細(xì)胞又可根據(jù)胞質(zhì)中顆粒的染色性質(zhì)不同，分為中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞三種。中性粒細(xì)胞是在瑞氏（Wright）染色血涂片中，胞質(zhì)呈無(wú)色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細(xì)小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細(xì)絲相連。中性粒細(xì)胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細(xì)胞來(lái)源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細(xì)顆粒。這些顆粒多是溶酶體，內(nèi)含髓過(guò)氧化酶、、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類，與細(xì)胞的吞噬和消化功能有關(guān)。中性粒細(xì)胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用，它處于機(jī)體抵御微生物病原體，特別是在化膿性細(xì)菌入侵的線，具有很強(qiáng)的吞噬活性，可吞噬細(xì)菌、衰老的紅細(xì)胞、抗原一抗體復(fù)合物和壞死的細(xì)胞等。中性粒細(xì)胞內(nèi)含有大量溶酶體酶，因此能將吞噬入細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌和組織碎片分解。當(dāng)中性粒細(xì)胞吞噬數(shù)十個(gè)細(xì)菌后，自身發(fā)生解體，所釋出的各種溶酶體酶類能溶解周圍組織而形成膿液。中性粒細(xì)胞是人體內(nèi)壽命短的細(xì)胞，一般體外培養(yǎng)12-24h內(nèi)活性穩(wěn)定，48h活性下降，96h基本死亡。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血中性粒采用取外周血、通過(guò)密度梯度離心法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血中性粒經(jīng)瑞氏染色法，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

血管內(nèi)皮抑素 (Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

內(nèi)皮素 -1(Endothelin-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

內(nèi)啡肽 - b (Endorphin- b )   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

內(nèi)皮細(xì)胞合酶 (eNOS)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠游離狀腺原酸(Free-T3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai histone aibody of ai -DNA (H2A-H2B) / two mer -DNA aibody ELISA Kit 人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體試劑盒

Humanepithelialspecificaigen,ESAELISAKit 人上皮特異性抗原(ESA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor8-iso-PG(Human8-isoprostaglandin)ELISAKit人8異前列腺素

異丁甲基細(xì)胞脂肪誘導(dǎo)生成比色法定量試劑盒20次

MouseMotilin,MTLELISAKit小鼠胃動(dòng)素(MTL)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/ DTID-ZJU10/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原 0.5mgPAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原

LRP1重組人 LRP1 / A2MR / CD91 蛋白 (aa 786-1165) Protein

CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白

ALPL Protein Human 重組人 Alkaline Phosphatase / ALPL 蛋白

PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原 0.5mgPAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原

CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/ DTID-ZJU10/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

ALPL Protein Human 重組人 Alkaline Phosphatase / ALPL 蛋白

LRP1重組人 LRP1 / A2MR / CD91 蛋白 (aa 786-1165) Protein

小鼠外周血中性粒細(xì)胞大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)試劑盒 ，英文名： HIF-1α ELISA Kit

Porcine plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒

廣州管圓線蟲(chóng)核酸試劑盒(熒光PCR法) 48T

CLIAKitforLRP-6(Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein)ELISAKit人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6

通用HRP酶聯(lián)檢測(cè)封閉溶液100毫升

ELISAKitsICAM-1雞可溶性細(xì)胞間粘附分子1

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。