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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

小鼠微血管周分離自微血管組織；周細(xì)胞（pericyte）又稱Rouget細(xì)胞和壁細(xì)胞，是一種包圍全身毛細(xì)血管和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞，可以收縮。周細(xì)胞嵌入毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞的成熟過程。此外，周細(xì)胞還具有調(diào)控毛細(xì)血管血流量、細(xì)胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細(xì)胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物、細(xì)胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細(xì)血管的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細(xì)胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細(xì)血管直徑的雙向調(diào)控；毛細(xì)血管受損時，周細(xì)胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠血管周采用膠原酶-聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠微血管周經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠Agoi相關(guān)蛋白(AGRP)檢測試劑盒 ，英文名： AGRP ELISA Kit

Mouse osteopoin (OPN) ELISA Kit 小鼠骨橋素(OPN)檢測試劑盒

Mousenuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumahrombopoietin,TPOELISAkit人血小板生成素

通用型羊弓形體剛地弓形蟲(Toxotest;Toxoplasmagondii)試劑盒20次

ELISAKitHSP47大鼠熱休克蛋白47

ERBB3重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

Nanog fragment 干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽)

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

DDR2 Protein Human 重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

CSNK2A1 Protein Mouse 重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

Nanog fragment 干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽)

DDR2 Protein Human 重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

ERBB3重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

CSNK2A1 Protein Mouse 重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒

Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISAKit 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanalkalinephosphatase,ALP檢測試劑盒人堿性0酸酶(ALP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物V型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit小鼠5羥色胺(5-HT)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠微血管周細(xì)胞小鼠環(huán)0酸鳥苷   英文名稱：   cyclic adenosine monophosphate   規(guī)格：      英文縮寫：   cGMP

小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子   英文名稱：   ciliary neuroophic factor   規(guī)格：      英文縮寫：   CF

白細(xì)胞分化抗原14   英文名稱：   cluster of differeiation aigen 14   規(guī)格：      英文縮寫：   CD14

可溶性細(xì)胞表面分化抗原40配體   英文名稱：   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   規(guī)格：      英文縮寫：   sCD40L